大鼠ELISA試劑盒本辦法要著重留意的是RF(1gM類)及其他非特異IgM的攪擾。RF(1gM類)因?yàn)槠淠芘c固相抗人u鏈抗體，并可與隨后參加的酶標(biāo)抗體(動(dòng)物IgG)反響，然后導(dǎo)致假陽(yáng)性反響。而非特異IgM因?yàn)槠湓?步溫育中，可與特異IgM競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體，所以會(huì)影響測(cè)定的靈敏度。因而，運(yùn)用本法測(cè)IgM，必須對(duì)臨床樣本進(jìn)行恰當(dāng)稀釋。樣本稀釋后，大鼠ELISA試劑盒上述產(chǎn)生攪擾效果的非特異IgM含量削減，而特異IgM因?yàn)樘幱谙鄳?yīng)病原體的急染期，滴度很高，必定稀釋后，不會(huì)有顯著影響，況且，在某些病原體如HBV的慢染期間，IgM類特異抗體也能繼續(xù)存在，只不過(guò)滴度要低許多。
因而，在運(yùn)用直接法測(cè)定IgM抗體時(shí)，一般須將血清樣本用抗人IgG抗體或A預(yù)處理，以去掉IgG的攪擾。這么不但測(cè)定較為繁瑣，并且影響測(cè)定的特異性和靈敏度?，F(xiàn)在，常用的IgM抗體檢查辦法為捕獲法，即以抗人IgM抗體(抗人u鏈)作為固相抗體，大鼠ELISA試劑盒當(dāng)參加血清標(biāo)本時(shí)，其間的IgM類抗體(特異的和非特異的)即可被固相抗體捕獲，再參加特異抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體后，參加酶標(biāo)抗特異抗原的抗體，zui終參加底物顯色。
大鼠ELISA試劑盒具體操作步驟如下：
1．首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過(guò)夜包被聚苯乙烯等固相，構(gòu)成固相抗體，洗刷去掉未與固相或不緊的抗體后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗刷去掉未的部分及雜質(zhì)。
2．參加含待測(cè)IgM抗體的臨床樣本如血清等，溫育必定時(shí)刻后洗板；此刻，待測(cè)樣本中的IgM抗體就會(huì)與固相上的抗P鏈抗體反響而吸附于固相上。
3．參加特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等，溫育必定時(shí)刻后洗板；此刻，特異抗原就會(huì)與固相上的特異IgM抗體發(fā)生反響。
4．參加酶符號(hào)的抗特異抗原的抗體，溫育必定時(shí)刻后洗板；此刻，在固相上即構(gòu)成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物。